常用培養(yǎng)基

                                                     檢碩科學(xué)器材（上海）有限公司

一、糖發(fā)酵管成分：牛肉膏 5克,蛋白胨 10克,氯化鈉 3克,磷酸氫二鈉  2克,0.2％滇麝香草酚藍(lán)溶液 12毫升,蒸餾水 1000毫升,PH 7.4制法1. 葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,按0.5％加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內(nèi)，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。2. 其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后，分裝每瓶1000 毫升，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。另將各種糖類分別配好10%溶液，同時高壓滅菌。將5毫升糖溶液加入于100 毫升培養(yǎng)基內(nèi)，以無菌操作分裝小試管。注：蔗糖不純，加熱后會自行水解者，應(yīng)采用過濾法除菌。 試驗方法：從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種，于36攝氏度±1攝氏度培養(yǎng)，一般觀察2～3d。遲緩反應(yīng)需觀察14~30d。 

 二、乳糖膽鹽發(fā)酵管成分：蛋白胨 20克,豬膽鹽（或牛、羊膽鹽）5克,乳糖 10克,0.04%滇甲酚紫水溶液 25毫升,蒸餾水 1000毫升制法：將蛋白胨，膽鹽及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管10 毫升，并放入一個小倒管，115攝氏度高壓滅菌15分鐘。注：雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。 

 三、5％乳糖發(fā)酵管成分：蛋白胨 0.2克,氯化鈉 0.5克,乳糖 5克,2%溴麝香草酚藍(lán)水溶液 1.2毫升,蒸餾水 100毫升,pH 7.4制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50毫升蒸餾水內(nèi)，校正pH。將乳糖溶解于另外50毫升蒸餾水內(nèi)，分別滅菌121 攝氏度 15分鐘，將兩液混合，以無菌操作分裝于滅菌小試管內(nèi)。注：在此培養(yǎng)基內(nèi)，大部分乳糖遲緩發(fā)酵的細(xì)菌可于ld內(nèi)發(fā)酵。 

 四、緩沖葡萄糖蛋白胨水（MR和VP試驗用）成分：磷酸氫二鉀 5克,多胨 7克,葡萄糖 5克,蒸餾水 1000毫升制法：溶化后校正pH，分裝試管，每管1毫升 ，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。甲基紅（MR）試驗：自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1攝氏度培養(yǎng)2～5d，哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25攝氏度培養(yǎng)。滴加甲基紅試劑一滴，立即觀察結(jié)果。鮮紅色為陽性，黃色為陰性，甲基紅試劑配法：10毫克甲基紅溶于30毫升95％乙醇中，然后加入20 毫升蒸餾水。V-P試驗：用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中，于36±1攝氏度培養(yǎng)2～4d。哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25攝氏度培養(yǎng)。加入6％α-萘酚-乙醇溶液0.5毫升和40％氫氧化鉀溶液0.2毫升充分振搖試管，觀察結(jié)果陽性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色，如為陰性，應(yīng)放在36±1攝氏度下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察。 

五、營養(yǎng)明膠成分：蛋白胨 5克,牛肉膏 3克,明膠 120克,蒸餾水 1000毫升,pH 6.8~7.0制法：加熱溶解，校正至pH7.4～7.6，分裝小管，121攝氏度高壓滅菌10分鐘，取出后迅速冷卻，使其凝固，復(fù)查最終pH應(yīng)為6.8～7.0。試驗方法：用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種，放在22～25攝氏度培養(yǎng)，每天觀察結(jié)果，記錄液化時間。或放在36士1攝氏度培養(yǎng)，每天取出，放冰箱內(nèi)30分鐘后再觀察結(jié)果。

 六、苯丙氨酸培養(yǎng)基成分：酵母浸膏 3克,DI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1克）2克,磷酸氫二鈉 1克,氯化鈉 5克,瓊脂 12克,蒸餾水 1000毫升制法：加熱溶解后分裝試管，121攝氏度高壓滅菌15分鐘，使成斜面。試驗方法：自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，移種于苯丙氨酸瓊脂，在36士1攝氏度培養(yǎng)4h或18～24h，滴加10％三氯化鐵溶液2～3滴，自斜面培養(yǎng)物上流下，苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色。 

七、蛋白胨水（靛基質(zhì)試驗用）成分：蛋白胨（或胰蛋白胨）20克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升,pH7.4制法：按上述成分配制，分裝小試管，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。靛基質(zhì)試劑柯凡克試劑：將5克對二甲氨基溶解于75毫升戊醇中，然后緩慢加入濃鹽酸25毫升。歐-波試劑：將1克對二甲氨基溶解于95毫升95%乙醇內(nèi)，然后緩慢加入濃鹽酸20 毫升。試驗方法：挑取小量培養(yǎng)物接種，在36士1攝氏度培養(yǎng)1～2d，必要時可培養(yǎng)4～5d。加入柯凡克試劑約0.5毫升，輕搖試管，陽性者于試劑層呈深紅色；或加入歐-波試劑約0.5 毫升，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面，陽性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸。每批蛋白胨買來后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。 

八、硫酸亞鐵瓊脂（硫化氫試驗用）成分：牛肉膏 3克,酵母浸膏 3克,蛋白胨 10克,硫酸亞鐵 0.2克,硫代硫酸鈉 0.3克,氯化鈉 5克,瓊脂 12克,蒸餾水 1000 毫升制法：加熱溶解，校正pH，分裝試管，115攝氏度高壓滅菌15分鐘，取出直立候其凝固。試驗方法：挑取瓊脂培養(yǎng)物，沿管壁穿刺，于36士1攝氏度培養(yǎng)1～2d，觀察結(jié)果。產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏Ｗⅲ耗c桿菌科細(xì)菌測定硫化氫的產(chǎn)生，應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基。  

九、尿素瓊脂成分：蛋白胨 1克,氯化鈉5克葡萄糖1克,,4%酚紅溶液 3 毫升,瓊脂 20克,蒸餾水 1000 毫升,20%尿素溶液 100毫升制法：將除尿素和瓊脂以外的成分配好，并校正pH，加入瓊脂，加熱溶化并分裝燒瓶。121攝氏度高壓滅菌15分鐘。冷至50～55攝氏度，加入經(jīng)除菌過濾的尿素溶液，尿素的最終濃度為2％，最終pH應(yīng)為7.2±0.1.分裝于滅菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆谩Ｔ囼灧椒ǎ禾羧…傊囵B(yǎng)物接種，在36士1攝氏度培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。尿素酶陽性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。 

十、（KCN）培養(yǎng)基成分：蛋白胨10克,氯化鈉 5克,,磷酸氫二鈉 5.64克,蒸餾水 1000 毫升,0.5%溶液 20 毫升,pH 7.6制法：將除以外的成分配好后分裝燒瓶，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每100 毫升培養(yǎng)基加入0.5％溶液2.0毫升（最后濃度為1：10000），分裝于12mm*100mm滅菌試管，每管約4毫升，立刻用滅菌橡皮塞塞緊，放在4攝氏度冰箱內(nèi)，至少可保存兩個月。同時，培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基，分裝試管備用。 

十一、營養(yǎng)瓊脂成分：蛋白胨10克,牛肉膏3克,氯化鈉5克,瓊脂15～20克,蒸餾水1000毫升制法：將除瓊脂以外的各成分溶解于蒸餾水內(nèi)，加入15%氫氧化鈉溶液約2毫升，校正pH至7.2~7.4。加入瓊脂，加熱煮沸，使瓊脂溶化分裝燒瓶，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。注：此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用，可傾注平板或制成斜面。如用于菌落計數(shù)，瓊脂量為1.5%；如作成平板或斜面，則應(yīng)為2%。  

十二、營養(yǎng)肉湯成分：蛋白胨 10克,牛肉膏 3克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升,pH7.4制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分裝燒瓶，每瓶225 毫升 ，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。 

十三、緩沖蛋白胨水（BP）成分：蛋白胨 10克,氯化鈉 5克,磷酸氫二鈉 1.5克,蒸餾水1000毫升,pH 7.2制法：按上述成分配好后以大燒瓶裝，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。臨用時無菌分裝每瓶225毫升。注：本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用。注：本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用。 

十四、EC肉湯成分：胰蛋白胨 20克,3號膽鹽（或混合膽鹽）1.5克,乳糖 5克,磷酸氫二鉀 4克 1.5克,氯化鈉 5克,蒸餾水 1000毫升制法：將上述成分混合，溶解后，分裝有發(fā)酵倒管的試管中，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。最終pH為6.9±0.2。 

十五、四硫磺酸鈉煌綠增菌液（TTB）基礎(chǔ)培養(yǎng)基多胨或眎胨 5克,膽鹽 1克,碳酸鈣 10克,硫代硫酸鈉 3克,蒸餾水 1000毫升,碘溶液 碘 6克,碘化鉀 5克,蒸餾水 20 毫升制法：將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中，加熱溶解，分裝每瓶100毫升。分裝時應(yīng)隨時振搖，使其中的碳酸鈣混勻，121攝氏度高壓滅菌15分鐘備用。臨用時每100毫升基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2毫升，,0.1%煌綠溶液1毫升。 

十六、鹽胱氨酸增菌液（SC）成分：蛋白胨 5克,乳糖 4克,磷酸氫二鈉 5.5克,L-胱氨酸 0.01克,蒸餾水 1000毫升1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法：稱取L-胱氨酸0.1克或（DL-胱氨酸0.2克），加1mol/L氫氧化鈉1.5毫升，使溶解，再加入蒸餾水8.5毫升即成。制法和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900毫升蒸餾水中，加熱煮沸，候冷備用。溶解于100毫升蒸餾水中，加熱煮沸，候冷，以無菌操作與上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1毫升。分裝于滅菌瓶中．每瓶100毫升，pH應(yīng)為7.0±0.1。 

十七、亞硫酸鉍瓊脂（BS）成分：蛋白胨 10克,牛肉膏 5克,葡萄糖 5克,硫酸亞鐵 0.3克,磷酸氫二鈉 4克,煌綠 0.025克,檸檬酸鉍銨 2克,亞硫酸鈉 6克,瓊脂 18~20克,蒸餾水 1000毫升,pH 7.5制法：1.將前面5種成分溶解于300毫升蒸餾水中。2將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50毫升蒸餾水溶解。3將瓊脂于600毫升蒸餾水中煮沸溶解，冷至80攝氏度。4將以上三液合并，補(bǔ)充蒸餾水至1000毫升，校正pH，加0.5%煌綠水溶液5毫升，搖勻，冷至50～55攝氏度，傾注平皿。注：此培養(yǎng)基不需高壓滅菌。制備過程不宜過分加熱，以免降低其選擇性。應(yīng)在臨用前一天制備，貯存于室溫暗處，超過48h不宜使用。  

十八、三糖鐵瓊脂（TSI）成分：蛋白胨 20克,牛肉膏 5克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化鈉 5克,硫酸亞鐵銨 0.2克,硫代硫酸鈉 0.2克,瓊脂 12克,酚紅 0.025克,蒸餾水 1000 毫升,pH 7.4 制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 毫升，搖勻，分裝試管。裝量宜多些，以便得到較高的底層。121攝氏度高壓滅菌15分鐘，放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

 十九、三糖鐵瓊脂換用方法成分：蛋白胨15克,眎胨5克,牛肉膏 3克,酵母膏 3克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化鈉 5克,硫酸亞鐵 0.2克,硫代硫酸鈉 0.3克,瓊脂 12克,酚紅 0.025克,蒸餾水 1000 毫升,pH7.4制法：將除瓊脂和酚紅以外的各成分溶解于蒸餾水中，校正pH，加入瓊脂，加熱煮沸，以溶化瓊脂。加入0.2%酚紅水溶液12.5 毫升，搖勻，分裝試管，裝量宜多些，以便得到較高的底層。121攝氏度高壓滅菌15分鐘，放置高層斜面?zhèn)溆谩?/p>

 二十、嗜鹽性試驗培養(yǎng)基成分：蛋白胨2克,氯化鈉 按不同量加,蒸餾水100 毫升,pH7.7制法：配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶100毫升。每瓶分別加入不同量的氯化鈉：（1）不加；（2）3克；（3）7克；（4）9克；（5）11克。待溶解后分裝試管，121攝氏度高壓滅菌15分鐘。

                                                                                                                                           本篇轉(zhuǎn)載至實驗之家